今天给各位分享pcr延伸时间的知识，其中也会对PCR延伸时间设长了进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！
本文目录
- PCR延伸时间是不是和扩增片段大小有关
- 做pcr,如何确定更佳退火及延伸的时间和温度
- PCR的延伸时间怎么确定
- PCR实验设置延伸反应的原因
- pcr循环过程中为什么预变 *** 的时间要长一些
- PCR延伸时间不够或者过长会怎么样
- pcr反应中延伸的时间取决于
一、PCR延伸时间是不是和扩增片段大小有关
PCR延伸时间上，实验室一般用95℃/30秒变 *** ，55℃/45秒退火，用的是95℃/20秒变 *** ，55℃/30秒退火。上面说的是常用的条件，如果扩增不出来就降低退火温度，特异 *** 不高就提高退火温度，一般都能做出来的。
耐热DNA聚合酶-Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然 *** 过程，其特异 *** 依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变 *** -退火-延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变 *** ：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复 *** ）：模板DNA经加热变 *** 成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留 *** 原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留 *** 链；
重复循环变 *** -退火-延伸三过程就可获得更多的“半保留 *** 链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
二、做pcr,如何确定更佳退火及延伸的时间和温度
退火的目的是为了使引物和DNA单链结结合，所以退火温度一定要低于目的DNA和引物的熔点温度。一般情况下引物的熔点温度为40~70度，熔点温度的高低与引物的大小与G+C的比例有关。延伸的温度取决于DNA聚合酶的最适温度，聚合的错配率，引物的熔点温度。最常使用的延伸温度为72度。但是根据你要扩增的产物与引物还是会有差距。
三、PCR的延伸时间怎么确定
1、退火温度低于引物Tm值5℃左右，一般在45～55℃。
退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值（Tm值=4(G+C)+2(A+T)）为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异 *** 有较大影响。
2、延伸时间：1min/kb(10kb内）。
引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
四、PCR实验设置延伸反应的原因
不知道你说的是PCR循环中的延伸还是循环结束后的终延伸。循环中的延伸步骤实际上是让taq聚合酶开始合成DNA，taq聚合酶是高温活 *** 酶，在72度的时候合成DNA。如果是循环结束后的5～10分钟终延伸，它的作用实际上是起到一个补偿作用，有时候你循环过程中的延伸时间没有控制好，聚合酶并没有延伸完毕就开始下一个循环了，这样一个终延伸可以使未合成完的DNA补完。另外还有就是使末端加A充分。
五、pcr循环过程中为什么预变 *** 的时间要长一些
在PCR循环中，预变 *** 的时间会比其他扩增步骤的时间长一些，这是因为：
1、Denat *** ation（变 *** ）步骤需要更长的时间来使DNA双链分离成两条单链，以便于后续的引物结合；
2、在预变 *** 时，反应体系中的酶和其他组分可以被充分激活，从而提高PCR反应的效率和特异 *** ；
3、较长的预变 *** 时间还有助于消除模板DNA上的二级结构或配对，使其更易于被引物识别和扩增。PCR循环：高温变 *** -低温复 *** -适温延伸过程，在合适条件下不断重复这个过程。
六、PCR延伸时间不够或者过长会怎么样
除非你特意设置非常短的时间，一般时间都是够得，Taq酶每分钟可以延伸1000bp。如果时间太短的话，扩不出目的条带，导致电泳图谱一片糊而没有主带；扩增时间过长的话会增加非特异 *** 扩增的可能 *** ，因为更远位置的非特异 *** 结合位点也有足够的延伸时间。
七、pcr反应中延伸的时间取决于
1、pcr反应中延伸的时间取决于待扩增片段的长度。
2、聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA *** ，PCR的更大特点是能将微量的DNA大幅增加。
3、PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变 *** 会变成单链，低温时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变 *** 温度，复 *** 温度，延伸温度之间很好地进行控制。
4、DNA的半保留 *** 是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变 *** 解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则 *** 成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变 *** 解链，当温度降低后又可以复 *** 成为双链。
OK，关于pcr延伸时间和PCR延伸时间设长了的内容到此结束了，希望对大家有所帮助。
