转膜时间 快速转膜液转膜时间

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其实转膜时间的问题并不复杂,但是又很多的朋友都不太了解快速转膜液转膜时间,因此呢,今天小编就来为大家分享转膜时间的一些知识,希望可以帮助到大家,下面我们一起来看看这个问题的分析吧!

本文目录

  1. 转膜时间怎么算
  2. 过夜转膜的时间与电流设置
  3. southern转膜时间
  4. 索莱宝快速转膜液时间确定
  5. 是不是分子量越大转膜时间越长
  6. wb转膜条件公式
  7. wb电转要多久

一、转膜时间怎么算

1、根据中国生物信息网资料显示转膜电流大小一般分子量大于100kda可用200 *** 恒流转膜100min按一个转膜槽计算,分子量小于100kda宜减小电流,可用160-180 *** 转膜90min分离的蛋白分子量小于100kda的选择转膜时间为120min分子量大于100kda的选择转膜时间为150min。

2、转膜,是将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体上,同时维持其相对位置和分辨率的过程。

二、过夜转膜的时间与电流设置

过夜转膜的时间与电流设置为30到60分钟,200到40毫安。根据查询相关资料显示,对于湿转法,过夜转膜的电流在200毫安到400毫安之间,转膜时间为30到60分钟。也可以在15到20毫安转膜过夜。 *** 段的大于50KD的可以选用350毫安,小片段的可以用 *** 毫安。具体转模时间视蛋白膜时间而定。

三、southern转膜时间

1、southern转膜时间根据分子量的不同,时间也不同,一般是18个小时。

2、将凝胶中的DNA进行碱变 *** 并将pH值恢复至中 *** 后,即可将凝胶中的DNA片段转移到固相支持物上。用于转膜的固相支持物有多种,包括硝酸纤维素滤膜(NCM)、尼龙膜、化学活 *** 膜和滤纸等,Southern转膜时可根据需要选择不同的固相支持物用于杂交。

3、此法是利用浓 *** 转移缓冲液的推动作用,将凝胶中的DNA转移到固相支持物上,转移方式见图。其原理是:容器中的转移缓冲液含有高浓度的NaCl和柠檬酸钠,上层吸水纸的虹吸作用使缓冲液通过滤纸桥、滤纸、凝胶、硝酸纤维素滤膜向上运动。

4、Southern印迹杂交是1975年由英国人southern创建,是研究DNA图谱的基本技术,在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。

5、Southern印迹杂交的基本 *** 是将DNA标本用 *** *** 内切酶消化后,经琼脂糖凝胶电泳分离各酶解片段,然后经碱变 *** ,Tris缓冲液中和和高盐下通过毛吸作用将DNA从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上、烘干固定后即可用于杂交。

四、索莱宝快速转膜液时间确定

索莱宝快速转膜液时间确定 *** :转完膜后的蛋白胶再重新染色。湿转的话,80V,2h,足以,想确定更佳转膜时间的话,可以将,看看的蛋白是否还在上面,蛋白都不会转的很完全,不过,做WB鉴定足以,无多大区别看个人习惯,恒流时,电压逐步增大,恒压时,电流逐步减小。

五、是不是分子量越大转膜时间越长

目的蛋白的分子量越大,需要的转膜时间越长,目的蛋白的分子量越小,需要的转膜时间越短。转膜分干转和湿转,恒流转膜一般0.8mA/cm2

分离胶浓度(%)线 *** 分离范围电泳时间(h)

对于湿转法:一般转膜的电流在200mA-400 mA之间,转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20 mA电流中转膜过夜。 *** 段的>50 KD的可以选用350 mA电流,小片段的可以用 *** mA。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定,目的蛋白的分子量越大,需要的转膜时间越长,目的蛋白的分子量越小,需要的转膜时间越短。

六、wb转膜条件公式

1、wb转膜条件公式:10% SDS溶液(m/v)。

2、将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体(例如NC膜)上,通常有两种 *** :毛细管印迹法和电泳印迹法。

转膜时间 快速转膜液转膜时间-第1张图片-

3、常用的电泳转移 *** 有湿转和半干转。两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者 *** 作容易,转移效率高;而后者适用于大胶的蛋白转移,所用缓冲液少。

4、在确定的条件下,带电粒子在单位电场强度作用下,单位时间内移动的距离(即迁移率)为常数,是该带电粒子的物化特征 *** 常数。不同带电粒子因所带电荷不同,或虽所带电荷相同但荷质比不同,在同一电场中电泳,经一定时间后,由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。

七、wb电转要多久

1、wb电转的时间是由电转方式以及蛋白分子量决定时间长久。

2、如果是湿转的话,60KDa的蛋白转膜60分钟~90分钟一般就足够了。转膜完成后可以将SDS-PAGE胶片去做一下考染,看看是否有未完全转膜的条带。如果有的话,可以下次适当延长专膜时间。

3、电转选择恒流的话,每个转印槽150 mA,10KD以下转印40min,10-30KD转印50min,30-100KD转印70min,100kd以上转印80min,转印完毕可用丽春红S染膜检测转印是否成功,转印结束后去除NC膜置于丽春红S溶液中,室温5-10min即可看见红色条带,用TBS洗数次即可洗掉红色条带进行后续实验。

文章分享结束,转膜时间和快速转膜液转膜时间的 *** 你都知道了吗?欢迎再次光临本站哦!

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